抗精子抗體相關(guān)介紹及檢查方法

抗精子抗體是一種復(fù)雜的病理產(chǎn)物，男性和女性都可能罹患。它會對男性精液產(chǎn)生抵抗作用，阻礙精子與卵子正常結(jié)合，進(jìn)而導(dǎo)致不孕不育。不過，其確切致病原因目前尚未完全明確。以下為您介紹抗精子抗體的檢查方法：

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

1. 精子抗原制備：篩選收集精液常規(guī)檢查正常的精液，用生理鹽水反復(fù)離心洗滌，盡可能除去精漿。經(jīng)超聲波超聲粉碎10 - 15min后高速離心，吸取上清液，測定其蛋白濃度，并將蛋白濃度稀釋為3.5 - 5.0μg/mL，制成精子抗原溶液。
2. 反應(yīng)板包被抗原：將人精子抗原稀釋成3.5 - 5μg/mL，把包被液加到聚氯乙烯微量測定板內(nèi)，每孔100μL，放置于4℃冰箱過夜。
3. 封閉處理：次日早晨，傾去抗原溶液，用洗滌PBS洗3次，每次5min，每次洗滌后將板在紙上拍干。再加入1%的聚乙烯醇溶液200μL封閉，置于室溫1h后按上述方法洗滌。
4. 加待測樣品：樣品用PBS稀釋100倍，每孔加入100μL，同時(shí)分別加入As - Ab血清及正常處女血清作為陽性和陰性對照，放置于37℃溫育1h，按上述方法洗滌。
5. 加酶結(jié)合物：HRP - Protein A以1∶640稀釋，每孔加入100μL，放置于室溫1h，按上述方法洗滌。
6. 酶反應(yīng)：加入新鮮配制的OPD底物溶液，每孔50μL，放置于室溫暗處10min，再加入10% H2SO4終止液每孔50μL。
7. 結(jié)果判定：用酶標(biāo)測定儀490μm測其OD值，OD值≥2.0時(shí)為陽性。

生物素 - 親和素酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

1. 在40孔微量測定板中加入2 - 6μg/mL人精子膜抗原包被液，每孔100μL，4℃過夜。加1%聚乙烯醇封板，37℃、30min，用洗液洗3次。
2. 待檢血清1∶1000稀釋（宮頸黏液1∶100），每孔100μL，37℃溫育60min，按上述方法洗滌。
3. 加入1∶100生物素化羊抗人IgG，IgA或IgM，每孔100μL，37℃、60min，按上述方法洗滌。
4. 加入1∶100酶標(biāo)親和素，每孔100μL，22℃溫育30min，按上述方法洗滌。
5. 每孔加底物100μL，37℃作用5 - 10min，加8mol/L H2SO450μL終止反應(yīng)。
6. 用酶標(biāo)檢測儀測A490光密度（OD）值，為雙份待測孔均值與雙份陰性孔均值之差，血清取OD值0.20（宮頸黏液取0.10）作為AsAb陽性的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，抗精子抗體的檢查主要有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和生物素 - 親和素酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)兩種方法，不同方法有其特定的操作流程和結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)。

參考權(quán)威站點(diǎn)來源：目前暫無公開權(quán)威站點(diǎn)可明確指向該內(nèi)容，但相關(guān)醫(yī)學(xué)知識可在專業(yè)醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)庫如萬方醫(yī)學(xué)網(wǎng)（https://med.wanfangdata.com.cn/）查詢。